Mga produkto

Ang pagsabut sa metabolismo sa microbial host hinungdanon alang sa pagpauswag ug pag-optimize sa mga proseso sa biocatalytic nga nakabase sa tibuuk nga cell, tungod kay kini nagdiktar sa kahusayan sa produksiyon.Tinuod kini ilabi na alang sa redox biocatalysis diin ang metabolically active cells gigamit tungod sa cofactor/cosubstrate regenerative capacity nga endogenous sa host.Ang recombinant nga Escherichia coli gigamit alang sa sobra nga produksyon sa proline-4-hydroxylase (P4H), usa ka dioxygenase nga nag-catalyze sa hydroxylation sa libre nga L-proline ngadto sa trans-4-hydroxy-L-proline nga adunay a-ketoglutarate (a-KG) isip cosubstrate.Niining tibuok-cell biocatalyst, ang sentral nga metabolismo sa carbon naghatag sa gikinahanglan nga cosubstrate a-KG, nga gidugtong ang P4H biocatalytic performance direkta ngadto sa carbon metabolismo ug metabolikong kalihokan.Pinaagi sa pagpadapat sa mga eksperimento ug computational biology nga mga himan, sama sa metabolic engineering ug (13) C-metabolic flux analysis ((13) C-MFA), among giimbestigahan ug gihubit ang gidaghanon sa physiological, metabolic, ug bioenergetic nga tubag sa tibuok-cell biocatalyst ngadto sa gitumong nga bioconversion ug giila ang posibleng metabolic bottlenecks para sa dugang rational pathway engineering. Usa ka proline degradation-deficient E. coli strain ang natukod pinaagi sa pagtangtang sa putA gene encoding proline dehydrogenase.Ang tibuok-cell biotransformations uban niining mutant strain misangpot dili lamang sa quantitative proline hydroxylation kondili sa pagdoble usab sa espesipikong trans-4-L-hydroxyproline (hyp) formation rate, kon itandi sa wild type.Ang pag-analisar sa carbon flux pinaagi sa sentral nga metabolismo sa mutant strain nagpadayag nga ang dugang nga a-KG nga panginahanglan alang sa P4H nga kalihokan wala makapauswag sa a-KG generating flux, nga nagpakita sa usa ka hugot nga gikontrol nga TCA cycle nga operasyon ubos sa mga kondisyon nga gitun-an.Sa wild type strain, ang P4H synthesis ug catalysis maoy hinungdan sa pagkunhod sa biomass yield.Makapainteres, ang ΔputA strain dugang nga nagbayad sa nalangkit nga pagkawala sa ATP ug NADH pinaagi sa pagkunhod sa mga panginahanglanon sa enerhiya sa pagmentinar sa ubos nga lebel sa pagsuyup sa glucose, imbes nga dugangan ang kalihokan sa TCA. Ang putA knockout sa recombinant E. coli BL21(DE3)(pLysS) nakit-an nga mahimong promisa alang sa produktibo nga P4H catalysis dili lamang sa mga termino sa biotransformation nga ani, apan usab mahitungod sa mga rate sa biotransformation ug proline uptake ug ang abot sa hyp sa tinubdan sa enerhiya.Gipakita sa mga resulta nga, sa usa ka putA knockout, ang pagdugtong sa TCA-cycle sa proline hydroxylation pinaagi sa cosubstrate a-KG nahimong usa ka hinungdan nga hinungdan nga nagpugong ug usa ka target aron mapauswag pa ang kahusayan sa mga biotransformations nga nagsalig sa a-KG.