Mga produkto

Aron espesipikong maihap ang daghang metabolite sa 5-fluorouracil (5-FU) ug duha ka endogenous monophosphate nucleotides, naghimo kami ug orihinal nga pamaagi base sa liquid chromatography–tandem mass spectrometry (LC-MS/MS).Kini nga assay nagtugot sa determinasyon sa: (i) ang intracellular nga produksyon sa 5-fluoro-2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (5-FdUMP) gikan sa 5-FU o 5-fluoro-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) , (ii) ang epekto sa 5-FdUMP nga konsentrasyon sa intracellular 2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (dUMP)/thymidine-5′-monophosphate (TMP) ratio, ug (iii) ang secretion extent sa 5-FdUMP ug 5-FU gikan sa human cultured cells sa ABC transporters.Ubos sa among mga kondisyon sa eksperimento, ang mga selyula gilumlom sa 5-FU o 5-FUrd.Pagkahuman, ang mga protina sa cellular gi-precipitate sa methanol.Kini nga pamaagi naghatag taas nga pagbawi sa pagkuha.Dugang pa, aron masukod ang 5-FU ug 5-FdUMP nga pagtago gikan sa mga selyula, gihimo namon ang pag-ihap sa kini nga mga molekula sa medium nga kultura.Ang media direkta nga gi-injected (5-FU) o ubos sa usa ka solid phase extraction gamit ang Oasis Wax extraction cartridge (5-FdUMP).Ang pagbulag sa mga analyte gihimo sa usa ka dC18 Atlantis 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) nga kolum nga adunay isocratic mode gamit ang ammonium formate buffer / methanol / tubig (5/5/90, v / v) isip mobile phase.Ang oras sa pagdagan dili molapas sa 6.2 min.Ang mga analyte gi-ionized sa usa ka electrospray interface ubos sa negatibo nga ion mode.Gi-validate namon ang pamaagi sa usa ka sakup nga 2.5-150 ng mL -1 sumala sa mga compound.Ang kabag-ohan sa intra-ug inter-assay mas ubos kaysa 10% sa pito ka adlaw.Ang tanan nga mga compound lig-on sa mga selula o sa medium nga kultura kung ang mga sample gitipigan sa −20 °C sulod sa labing menos duha ka semana, ug pagkahuman sa tulo nga mga siklo sa pag-freeze-thaw.Walay epekto sa matrix nga naobserbahan sa duha ka media.